啤酒微生物检验过程样品的处理及检出方法(2)

　　2.1.2 NBB培养液最好分装到无菌试管中。过滤膜可卷成条形插入试管，酵母样可直接加进去（约0.5mL酵母混入10mL培养液中）。须注意的是，同样要防止酵母的自溶而干扰培养基的变色。培养时间同样在5天以上，但不一定要置于二氧化碳环境中。

　　2.1.3 NBB浓缩培养液对处理后酵样比较合适。使用时，先将大约7mL浓缩液加入180mL无菌取样瓶。接着，进行无菌取样操作。取样瓶可能会因为泡沫太多而取不满样品，那么，应等泡沫消失完，再在剩余空间用无菌水布满，以排除氧气，同时进行稀释浓缩液，进行充分混匀。

　　通过在下部沉积的部分沉淀，用显微镜就可观察到细菌生长繁殖情况（一般，在视野中会出现一个或多个可疑细胞，如果细胞为单个形式，则表明此微生物为死细胞或无害微生物）。

　　同样，含酵母的前酵或后酵啤酒可以非常方便地用NBB-C培养基来检测。当然，浑浊样品也可以直接采用NBB-B培养基来检测。利用无菌取样瓶夺取大约1mL样品，静止一段时间使酵母沉降，从下面用无菌吸管或无菌棉签取大约0.5mL样品，注入70%的NBB-B培养液，培养过程进行封盖并保持松开状态，以方便二氧化碳的溢出。

　　2.2 乳酸杆菌琼脂培养基（或培养液）

　　一般，通过添加5%的啤酒，可使培养效果更加明显。当然，最好是添加（含酒花成分较少）小麦啤酒。同样，为防止酵母在培养基的干扰，也要适量加入放线菌酮，若添加部分指示剂，则可观察酸类的形成。此培养基的使用方法和检测与NBB培养基相同，培养条件同样在5天以上。

　　2.3 VLB-S7培养基

　　此培养基是专门用来检查啤酒有害菌，其中含有的指示剂为溴甲酚绿，因而在酸时会变色。其使用方法同样与上述类似。

　　2.4 低浓度酒花啤酒培养基

　　操作时，把样品接种到装有低酒花的啤酒无菌瓶中，低酒花啤酒应装满到瓶口。若10天内样品中出现浑浊，则表明有细菌污染，此时可通过镜检观察到。

　　2.5 由于用糖化不完全的麦汁生产的啤酒特别容易感染乳酸杆菌，因此，在这样的条件下，可将水溶性淀粉加到啤酒中，同时将加样品布满瓶口，接着培养一周，看淀粉浑浊情况。

　　2.6 异类酵母的检出

　　最基本的思路是从大量的酵母中检查是否存在异类酵母。由于异类酵母与培养酵母很类似，因此，选择性地检出各异类酵母的难易程度是不一样的。一般是通过几种方法进行组合，以使检验效果更具说服力。

　　2.6.1 抗热性试验

　　一般，异类酵母具有较强的抗热性，用吸管取2mL—3mL酵母样注入一无菌瓶中。若样品为酵母泥，则先用生理盐水进行稀释处理，接着进行无菌瓶封口，置于一准确恒温到50℃（±1℃）的水浴锅中，浸20分钟，然后取出并立即冷却，将其内容物注入一装有无菌麦汁的杜氏发酵管中，然后检查是否存在发酵现象。

　　2.6.2 醋酸钠琼脂培养基

　　醋酸钠琼脂培养基可导致孢子的形成，它是一种无营养培养基。此外，它含有附带能加速孢子形成的醋酸钠。若酵母在经抗热性试验中仍有发酵现象，可将其洗涤后进行划线在上述培养基上。酵母的洗涤可先经过离心沉降，用生理盐水制成菌悬液，再经过离心沉降，反复3次左右。通过28℃、培养48小时后，进行镜检，若有大量孢子形成，则表明是酵母属的异类酵母，而培养酵母则需要较长时间才能形成孢子。

　　2.6.3 结晶紫琼脂培养基

　　结晶紫可抑制培养酵母和非酵母属的野生酵母的生长，而对酵母属的野生酵母则无影响。将一瓶已制备好的麦汁琼脂培养基液化溶解，然后将20ppm的结晶紫加入已融化好的热培养基中。结晶紫最好先用几毫升酒精溶解，结晶紫琼脂培养基每次应新鲜配制。酵母样先经洗涤后划线在此培养基上，2天—3天后长出的菌落，通常为酵母属的异类酵母。